Extraction et purification partielle de la chaperonine cytoplasmique CCT

Abstract

Les chaperons moléculaires assistent le repliement des protéines et sont classés en plusieurs familles en fonction de leurs poids moléculaires. On retrouve parmi eux la famille de Hsp60 à laquelle appartient la chaperonine cytoplasmique CCT. La CCT est un complexe oligomérique composé de deux anneaux empilés composé chacun de huit sous- unités différentes. Elle interagit avec des polypeptides naissants ou mal repliés parmi lesquels les actines et les tubulines ou encore des protéines oncogéniques comme le suppresseur de tumeur de Von Hippel Lindeau (VHL). La CCT a été extraite et purifier à partir de deux sources différentes : le lysat de réticulocytes de lapins et le foie de mouton dans des conditions que nous avons optimisé par chromatographie échangeuse d’anions Q-Sepharose. Les résultats de l’électrophorèse sur gel dénaturant SDS-PAGE 12% que nous avons réalisé montre que le protocole que nous avons suivi permet d’éliminer une majorité de protéines contaminantes et d’obtenir la chaperonine cytoplasmique sous une forme assez pure.